II Sacro Militare Ordine Marittimo dei Cavalieri di Santo Stefano fu istituito alla fine del 1561 per volontà di Cosimo I de' Medici, Duca di Firenze e Siena, che il 15 marzo del 1562 a Pisa vestì l'abito di Gran Maestro dell'Ordine, alla presenza del Nunzio Pontificio.